基因工程中用到的連接酶主要是大腸桿菌DNA連接酶以及T4 DNA連接酶，目前后者的應用更為廣泛。T4 DNA連接酶可以修補雙鏈DNA、雙鏈RNA或DNA/RNA雜合鏈上的單鏈切口，使兩個相鄰的核苷酸連接起來，在DNA修復和重組中起著重要的作用。下面讓我們一起來看看NEB T4 DNA連接酶(M0202V)的產品介紹。

NEB T4 DNA連接酶可以催化雙鏈DNA或RNA中并列的5'磷酸鹽和3'羥基末端之間形成磷酸二酯酶鍵。這種酶將連接鈍端和內聚端，并修復雙鏈DNA和一些DNA/RNA雜交體中的單鏈缺口。

操作方法：

1. 在冰上的微量離心管中設置以下反應。

* T4 DNA 連接酶緩沖液應解凍并在室溫下重懸。

2. 通過上下移液和微量離心輕輕混合反應。

3. 對于粘性（粘性）末端，在 16°C 下孵育過夜或室溫孵育 10 分鐘。

4. 對于鈍端或單堿基突出端，在 16°C 下孵育過夜或室溫孵育 2 小時（或者，5. 高濃度 T4 DNA 連接酶可用于 10 分鐘的連接）。

6. 在 65°C 下加熱滅活 10 分鐘。

7. 在冰上冷卻并將1-5μl反應物轉化為50μl感受態細胞。

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