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Toxin金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)的應用

更新時間:2024-08-14點擊次數:1640

金黃色葡萄球菌腸毒素BStaphylococcal enterotoxin B, SEB)由于具有超抗原性,且在SEs系列毒素中毒性最qiang、最為耐熱,對腸胃道蛋白酶最有抵抗性,在食品加工過程中極難去除,故對人類健康具有嚴重的威脅。

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金黃色葡萄球菌腸毒素B單克隆抗體的研制及雙功能免疫層析試紙條產品開發一文中,就首先以SEB為免疫原,通過免疫Balb/C小鼠,測定小鼠血清效價、細 胞融合、篩選陽性雜交瘤細胞、亞克隆以及抗體配對等一系列操作,最終獲得兩株能穩定分泌抗SEB單克隆抗體的細胞株(分別命名為15H115D6),且兩株抗體能夠與SEB形成穩定的三明治"夾心結構;兩株抗SEB單克隆抗體均為IgG1 亞型,親和常數分別為2.08 × 109 M以及1.81 × 109 M;且與其它四種常見腸毒素 SEASECSED以及SEE均無交叉反應。 其次,以油氨修飾的金納米粒子(AuNPs@OA)、紅色聚集誘導發射熒光染料(AIEgens)為比色、熒光功能材料,1-十八烯馬來酸酐聚合物(PMAO)為填充劑,通過微乳液法合成了具有Janus結構的比色-熒光雙功能納米微球(JAIE@Au NBs)。由于AuNPs@OAAIEgens在聚合物PMAO中溶解度存在極大差異,在氯仿蒸發過程中AuNPs@OAAIEgens發生明顯相分離,導致AIEgens自動聚集成核,PMAO形成殼層,而AuNPs@OA分布在PMAO層一側,因而形成了具有Janus結構的比色-熒光雙功能J-AIE@Au NBs。由于AuNPsAIEgens存在物理間隔,且AuNPsAIEgens一側,因此有效地消除了兩者之間的能量轉移,且降低了熒光內濾效應,從而極大地保留了AIEgens的熒光信號。隨后將單克隆抗體15H11標記J-AIE@Au NBs獲得免疫探針,在NC膜上噴涂抗體5D6制備獲得比色定性以及熒光定量檢測SEB的免疫層析試紙條J-AIE@Au-ICA。在最佳條件下,該試紙條檢測全脂乳中SEB的定量線性范圍為0.39 ng/mL ~ 400 ng/mL,最di檢測限(Limit of detection, LOD)為0.09 ng/mL,靈敏度較傳統ELISA法提高了近70 倍;同時,采用比色法裸眼定性檢測SEB的最di檢測限為1.56 ng/mL。該試紙條 檢測全脂乳中SEB的批內、批間加標回收率為86.0 2%115 %,變異系數介于 4.97 %12.86 %之間,且與其它4種常見腸毒素無交叉反應。此外,該試紙條檢 測生牛乳以及脫脂乳中SEBLOD分別為0.19 ng/mL0.19 ng/mL。隨后,將試紙 條分別用于檢測人工污染SEB的全脂乳、生牛乳和脫脂乳樣品,結果顯示回收率 介于91.04 %118.82 %之間,變異系數介于3.91 %12.86 %之間。以上結果表明,本研究建立的比色、熒光雙功能試紙條能夠實現對多種牛奶中的SEB快速且準確的定量分析。

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